Medina Gladys, Tibisay Escobar, Franco Bianchi,
Adriana Trujillo, Virgilio Hernández e Irineo Matheus

Las encefalitis equinas son enfermedades virales infecciosas no contagiosas, transmitidas a los susceptibles a través de la picadura de mosquitos infectados (Acha y Zyfres, 1995). El genoma viral de estos virus está constituido por ARN, de una sola cadena, monocatenario y en sentido positivo. Pertenecen a la familia Togaviridae, genero alfavirus, (Strauss y Strauss, 2000). Estos virus encefaliticos son: Encefalitis Equina del Oeste (EEO), Encefalitis Equina del Este (EEE) y Encefalitis Equina Venezolana (EEV), todas ellos de importancia en la salud pública para el continente americano (Calisher, y Karatbasos 1988). Estos virus se caracterizan por afectar al sistema nervioso central y causar lesiones neurológicas que pueden ser reversibles o no y de acuerdo a la variante actuante y su agresividad puede causar la muerte tanto en équidos como en humanos (Strauss y Strauss 2000; Weaver y col., 1999). Estas enfermedades, han sido responsables de epidemias en varios países del continente americano, diezmando la población equina y produciendo el deceso de cientos de humanos, (Ruiz, 1997). A corto plazo, esto trae como consecuencia, sobre todo en las áreas rurales de los países, disminución en la producción agrícola y pérdida de vidas humanas. A largo plazo, trae como consecuencia en la producción agrícola, un alto costo para el control de vectores responsables de la diseminación, y la implementación de vacunaciones impulsivas, (Medina y col., 2000; De la Hoz., 2000).

Igualmente, el virus ha sido involucrado como agente causal de aborto tanto en animales como en seres humanos, en donde, ocasionalmente se han encontrado malformaciones congénitas en fetos, secuelas neurológicas y así como el tratamiento de los casos etc. García-Tamayo y col., Weaver y col (2010) señalan a los virus de encefalitis equina venezolana como una amenaza tanto en el presente como en el futuro para la salud pública. Las bajas coberturas de vacunación en las especies más susceptibles (équidos), han permitido la re-emergencia de estas patologías conllevando a la ocurrencia de la enfermedad en la especie humana.

En Venezuela, la aplicación de los sistemas de vigilancia epidemiológica para las encefalitis equinas por parte de los entes oficiales responsables de estas actividades y constituidos por: recolección de muestras sanguíneas de équidos en áreas de riesgos, captura de mosquitos, colocación de hámsteres centinelas y captura de roedores silvestres, es escasa y hasta nula. Adicionalmente, los registros de censos agropecuarios, coberturas de vacunaciones, numero de dosis aplicar al efectivo caballar, así como, deficiencia de infraestructura y personal por parte de estos organismos, complica aún más la efectividad de los programas de vacunación para el control y prevención de estas patologías. Por otra parte, las vacunaciones masivas de équidos con la vacuna monovalente TC83 a virus vivo modificado complica el panorama inmunológico ya que no se puede discernir entre anticuerpos vacúnales y anticuerpos por efecto de circulación viral.

En virtud de lo antes expuesto se considera utilizar bóvidos lecheros como centinelas para la detección de actividad viral contra los virus productores de brotes de encefalitis equinas en Venezuela, así como evaluar el comportamiento de la vacuna TC83 en campo, a partir de équidos vacunados contra EEV.

Metodología

Se realizaron encuestas epidemiológicas y serológicas de acuerdo al Censo Agropecuario 2004. Se consideraron animales bovinos jóvenes, nativos de la localidad, así como también de équidos con registro de vacunación en diferentes localidades de Venezuela (Cojedes, Lara, Yaracuy Guárico, Carabobo y Barinas). Las fincas seleccionadas fueron con actividad de producción lechera. Los bóvidos considerados en el estudio corresponden al 10% de la población animal de la finca, con edad comprendida entre mayores o iguales a seis meses y menores o iguales a dos años de edad; por ello se consideraron fincas que tuviesen una población animal de bovinos jóvenes de al menos 50 animales. Para el caso de los équidos se consideraron los animales pertenecientes a las fincas previamente seleccionadas y con historia de vacunación. La cantidad de animales muestreados entre bovinos, equinos y búfalos fueron en total mil quinientos treinta y cinco sueros (1.535).

La sangre de los bovinos y equinos se colectó por punción de la vena yugular con tubos vacutainers al vacío. Las muestras colectadas, una vez retraído el coagulo, se centrifugaron a 1.500 rpm/10 minutos. Los sueros obtenidos fueron envasados en viales y mantenidos en hielo de agua o a -20°C hasta su procesamiento mediante pruebas serológicas en el laboratorio. La técnica utilizada para la detección de anticuerpos en los sueros fue la técnica clásica de inhibición de la hemoaglutinación (IHA) método microtécnica (Clark y Casals, 1958). Se consideran positivos todos aquellos sueros que den títulos mayores o iguales a 1:20; con 8 y 16 unidades hemaglutinantes para los antígenos de EEV y EEE, control de aglutininas, control de glóbulos rojos y control de controles positivos y negativos de referencia.

Resultados y Discusión

En el Cuadro 1 se muestra la distribución de los sueros por fincas, estado y municipio, para un total de mil quinientos treinta y cinco (1.535) sueros distribuidos en 11 municipios correspondientes a siete estados.

Cuadro 1. Distribución de las muestras analizadas por municipio y estado

Las muestras colectadas en estas localidades se tomaron en función de áreas de riesgo tanto para los virus de EEV y EEE; es decir en el pasado, se ha reportado aislamientos virales de encefalitis equinas en esas localidades, ya sea a partir de équidos enfermos, hámsteres centinelas o mosquitos capturados en campo durante brotes epidémicos o porque dichos virus circulan en focos o nichos enzoóticos en esas zonas (Walder y col., 1981; Parra y col 1976; Salas y col 2001).

El hecho que se usen vacunas a virus vivo modificado (VVM) en forma sistemática, generan títulos de anticuerpos en los équidos que pueden alcanzar títulos mayores o iguales a 1: 2.560 mediante la técnica IHA y rangos entre 1:640 y 1:1280 por seroneutralización en cultivos celulares (SNCC), estos resultados sin una buena historia de vacunación y procedencia de los animales de áreas de riesgo impide determinar si los anticuerpos detectados para EEV, en los équidos sean por efecto de vacunaciones previas o por contacto directo de los équidos con el virus. Análisis previos de 3.000 muestras séricas para la detección de anticuerpos para el virus de EEV mediante las técnicas de IHA y SNCC han permitido demostrar que es imposible diferenciar por estos métodos la presencia de los anticuerpos vacúnales versus anticuerpos por efecto del virus en los équidos.

Kinney y col. (1989) demuestran que la cepa vacunal TC83 de EEV y el virus causante de brotes epidémicos IAB (TrD), posee dos mutaciones puntuales importantes que permiten diferenciar a estas cepas virales entre sí. De allí, que desde el punto de vista serológico exista reactividad cruzada entre las variantes del subtipo I (IAB/IC) del virus de EEV. Dado los inconvenientes de discernir la presencia de anticuerpos por EEV en los équidos, se consideró la utilidad de los bóvidos como animales centinelas para la detección de actividad para los virus de EEV y EEE. Los bóvidos muestreados en esas áreas, nos indicarían con mayor exactitud lo que realmente ocurre en campo. Adicionalmente, los bóvidos no son vacunados contra las encefalitis equinas, comparten los mismos habitas que los équidos y los mosquitos trasmisores tienen hábitos alimenticias por estas especies animales similares a los équidos, en consecuencia los anticuerpos que se puedan detectar en los bóvidos seria por acción directa del virus sobre estos animales, (Wang y col 2005). Asimismo, los équidos con presencia de anticuerpos para el virus de EEE, nos indicarían al igual que los bóvidos que existe circulación de los virus encefaliticos para estos virus en esas localidades y en esas especies, debido a que las vacunas disponibles contra EEE no son aplicadas en las fincas en forma sistemática por su alto costo y manejo (doble dosis a intervalo de 28 días). Por otra parte, resultados obtenidos de las pruebas de potencia en cobayos (mimetizan a los equinos para la EEV) con vacunas inactivadas generan bajos títulos de anticuerpos (1:20 y 1:40) al someter los sueros mediante la técnica de IHA. (Datos del Laboratorio de Arbovirus).

El Grafico 1 muestra resultados obtenidos para los virus EEV y EEE en sueros de los équidos analizados. Para el caso particular del virus EEE se observa que hubo actividad silvestre en el municipio Girardot del estado Cojedes. Los sueros de equinos analizados de este municipio, con títulos mayores o iguales a 1:40 por IHA se sometieron para la detección de IgM, encontrándose sueros positivos para esta inmunoglobulina. Adicionalmente se puede observar que parte del brote se extendió a los municipios aledaños de Tinaco y El Pao del estado Cojedes. El porcentaje de seropositividad para EEE detectado procedente del municipio Girardot fue 72%, mientras que los municipios El Pao y Tinaco fueron de 33,3% y 31,7% respectivamente. Es importante señalar que los sueros analizados, procedentes de los municipios estudiados del estado Cojedes fue en atención a mortalidad equina, acompañado de signos neurológicos, presente en esas localidades, por lo que funcionarios adscritos al Servicio Autónomo de Sanidad Agropecuaria (SASA), atendieron el problema y remitieron las muestras al Laboratorio de Arbovirus de Sanidad Animal-INIA.

Es importante destacar, que en Venezuela no existe inmunobiológico disponible en el mercado para controlar y prevenir la EEE. Por tanto, no se vacunan los équidos, están desprotegidos para este agente viral y en consecuencia los anticuerpos detectados son producto de la exposición natural. Los títulos de anticuerpos detectados en los sueros equinos para el virus de EEE oscilaron entre 1:80 y mayores o iguales 1:640. Adicionalmente en dos sueros procedentes del municipio Girardot del estado Cojedes se detectó IgM, lo cual significa infección reciente o un período de infección no mayor de dos meses. Para el virus de EEV se evidenció un 79,5 %; 73,2 % y 22,20% de seropositividad en los municipios El Pao, Girardot y Tinaco del estado Cojedes, respectivamente. La presencia de anticuerpos en los équidos para el virus de EEV sugiere que es producto de vacunaciones efectuadas previamente y por consiguiente la existencia de un estado inmunológico de protección contra este virus. Esta aseveración se fundamenta en la interpretación epidemiológica, serológica y la ausencia de aislamiento viral en la localidad. Adicionalmente, los resultados serológicos obtenidos reflejan las bajas coberturas de vacunación en el municipio Tinaco, al detectarse un 36,11% de seropositividad al EEV al compararse con los otros municipios señalados.

En lo que respecta al municipio Urdaneta del estado Lara los resultados de dicho muestreo en los équidos indican una baja cobertura de vacunación para el virus de EEV, al detectarse una seropositividad del 36,41%; mientras para el virus de EEE la seropositividad detectada fue de 16,66%; en consecuencia la población equina susceptible a los virus de EEV y EEE fueron de 63,59 % y 83,34 % respectivamente. Estos resultados nos permiten inferir que en el municipio Urdaneta del estado Lara no vacunan a los équidos en forma sistemática al menos para el virus de EEV. Por otra parte, los nichos existentes para el virus de EEE se encuentran concentrados en áreas muy pequeñas donde la transmisión entre el vector y las especies susceptibles es muy baja, en función de la seropositividad detectada en esa área.

Finalmente se observan los resultados de las muestras de équidos procedentes del municipio J.J. Mora del estado Carabobo. Estos sugieren una buena cobertura de vacunación en los equinos con la cepa TC-83, alcanzando un porcentaje de seropositividad para el virus de EEV de 86,6% de las muestras analizadas; mientras que para el virus de EEE la seropositividad fue de 45,0%. Este resultado puede reflejar la existencia de reacciones serológicas cruzadas por pertenecer ambos virus al mismo género y familia o la presencia de un nicho ecológico importante para el virus de EEE en esa localidad del estado Carabobo.

En forma general, es relevante la interpretación de resultados serológicos cuando se conoce la historia de vacunación de los animales y se evidencia la respuesta inmunológica sugestiva por efecto de vacunaciones previas para el caso de la EEV. Por otro lado, es interesante, los resultados obtenidos para el virus de EEE en los mismos sueros de équidos, donde la respuesta serológica es por efecto de circulación viral, ya que no se disponen de vacunas contra este agente viral.

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Estado Cojedes: Municipio Pao, Girardot y Tinaco; Estado Lara: Municipio Urdaneta; Estado Carabobo: Municipio J.J. Mora.

Grafico 1. Porcentaje de Seropositividad a los Virus de Encefalitis Equina Venezolana y Encefalitis Equina del Este en equidos pertenecientes a municipios de Venezuela mediante la técnica de IHA.

En el Grafico 2, se observan los resultados obtenidos usando bóvidos jóvenes como centinelas para la detección de anticuerpos contra los virus de EEV y EEE, mediante la técnica de IHA, en los municipios: San José de Guaribe del estado Guárico; Ezequiel Zamora, las Parcelas y Obispos del estado Barinas; San Juan de los Cayos, Capadare y La Pastora del estado Falcón; J.J Mora del estado Carabobo y Manuel Monge y Bolívar del estado Yaracuy. Estos resultados sugieren que los virus de encefalitis equinas (EEV y EEE) en esos municipios tienen una actividad silvestre o endémica entre baja y mediana al detectarse una tasa de seropositividad general entre el 2,4% y 13,8% para ambos virus. Estos resultados indican que la triada virus, reservorio (marsupiales, roedores y posiblemente algunas aves) y mosquitos se encuentran en un nicho muy pequeño y por tanto la tasa de transmisión del virus es baja o mediana entre los huéspedes susceptibles. Los resultados observados en los sueros de bóvidos de los municipios Zamora, las Parcelas y Obispos del estado Barinas, conllevan a sugerir que las localidades de mayor riesgo para un brote de EEV son Las Parcelas y Zamora, con 8,6% y 13,6% de seropositividad respectivamente. Por ello, las coberturas y planes de vacunación de los équidos deben estar enfocados en esas áreas.

Los resultados serológicos obtenidos en sueros de bóvidos de municipios del estado Falcón (San Juan de los Cayos, Capadare y la Pastora) para el virus de EEV y EEE fueron bajos (menos del 7% de seropositividad); sin embargo el municipio Capadare mostró una seropositividad en los bovinos mayor al 10% para EEE. A pesar que regiones de la costa del estado Falcón son consideradas de alto riesgo para el virus de EEV, y en años previos (1999-2000) equinos muestreados a zonas aledañas, como la montaña de Aurorima, se detectó IgM. Los resultados obtenidos de sueros de animales muestreados en este estudio, refleja que la tasa de transmisión del virus entre los huéspedes susceptibles es baja. Posiblemente, este hecho se deba a cambios ecológicos detectados en la zona, donde la presencia de la tala de bosques para aumentar el tamaño de las fincas incida en una reducción drástica de los nichos ecológicos naturales donde habitan estos virus. Resultados similares a los observados en los municipios de Barinas y Falcón fueron observados también en bovinos muestreados del municipio JJ Mora del estado Carabobo, donde la tasa de seropositividad para EEV fue de 8,9% y para EEE fue de 4,8%. Ahora bien, un caso particular en finca con cría y ceba de búfalos, la actividad para EEV fue de 14,0 % y para EEE fue de 1,16% (datos no mostrados).

Adicionalmente, otra explotación ganadera con cría intensiva de búfalos jóvenes (menores de 9 meses) mostraron un porcentaje de actividad para el virus de EEV del 34%, el cual sugiere que el virus de EEV en esa localidad es alarmante; sin embargo las coberturas de vacunación con la cepa vacunal TC-83 de EEV es alta (cercana al 95%), lo que permite la protección de los equinos a esta patología. Por otra parte, es bueno considerar y recordar que los équidos son los amplificadores primarios del virus de EEV durante los brotes epidémicos y posterior a unas dos o tres semanas de iniciada la enfermedad en los équidos se presentan los casos humanos; de allí la razón principal de vacunar a los équidos contra este agente viral que afecta también a los humanos (zoonosis).

Los resultados obtenidos en el municipio Bolívar del estado Yaracuy, mostraron una seropositividad para el virus de EEV de 1,8% mientras que para EEE la seropositividad detectada en los bovinos fue de 60%. En el municipio Manuel Monge la seropositividad fue de 10,7% y 13,8% para los virus de EEV y EEE respectivamente. Los resultados serológicos obtenidos a partir de bóvidos, nos permiten inferir la situación real de estos virus a nivel de campo, dado que los bovinos y búfalos no son vacunados; sin embargo la presencia de anticuerpos en ellos es indicativo de circulación de estos virus en un periodo menor a dos años en función de la edad de los animales muestreados.

Trabajos previos realizados por Morilla y col (1977), Walton y Jhonson (1972) y Dickerman y col (1973), Gallo y col (1979), demostraron la efectividad de los bovinos como centinelas para la detección de actividad viral en zonas de riesgo. Asimismo, Morilla y col (1977) demostraron que los anticuerpos detectados en bovinos correspondían a efectos del virus circulante, ya sean cepas enzoóticas o epidémicas de EEV y sugieren que los bovinos pueden actuar como reservorios y amplificadores del virus de EEV, debido a que un gran porcentaje de estos animales mostraron títulos de anticuerpos específicos que pudieran ser provocados por virus natural o de campo o incluso vacunal. Más recientemente Medina y col (2001) y Navarro y col (2005) detectaron actividad viral para los virus de EEV en bovinos jóvenes lecheros en municipios de Sur del Lago de Maracaibo y Barinas respectivamente; sin embargo el numero de animales bovinos muestreados fue limitado. Ulloa y col (2003) detectaron actividad viral usando bovinos centinelas en Chiapas, México; Morilla, 1977 infieren que dado el numero de bovinos existente en algunas localidades sobrepasa el numero de equinos, por lo que la distribución de los bovinos alrededor de poblados y la estrecha relación con los seres humanos hace importante el papel que los bovinos pueden jugar en la epizootiología de la EEV. Sin embargo el número de animales muestreados por estos investigadores en la realización de dichos estudios, fue bajo (51 animales menores de 2 años en áreas enzoóticas; o animales inoculados experimentalmente que no alcanzaban una población de 10 bovinos), lo que desde el punto de vista estadístico era imposible inferir estos resultados con la realidad presente a nivel de campo. Wang y col (2005), sugieren la posibilidad de usar a los bovinos como centinelas, debido a que estos animales conviven en las mismas áreas que los équidos y presentan anticuerpos específicos contra los virus de EEV pero son refractarios a la enfermedad. Para la realización de este trabajo se consideraron municipios en la cual se conoce por registros históricos, actividad viral para los virus de encefalitis equinas usando a los bovinos jóvenes lecheros como centinelas para la detección de actividad viral para estas patologías.

El análisis de los resultados obtenidos usando bóvidos jóvenes y lecheros y el porcentaje de coberturas de vacunación en los huéspedes susceptibles permitieron inferir el riesgo de brote o epidemia para estos virus en los municipios estudiados y categorizarlos en Bajo riesgo: Áreas o zonas cuya detección de anticuerpos por HI en bóvidos estaba entre 0% y 10% y una cobertura de vacunación en los équidos mayor o igual al 80%; Medio o moderado riesgo: Aquellas áreas o zonas cuyos niveles de detección de anticuerpos HI en bóvidos estén entre 11% y 24% y una cobertura de vacunación en équidos menor al 79% y Alto riesgo: con niveles de detección de anticuerpos HI en bovinos mayores de 25% y coberturas de vacunación en équidos por debajo del 30%.

Estado Guárico: Municipio San José de Guaribe; Estado Barinas: Municipios Ezequiel Zamora, Las Parcelas y Obispos; Estado Falcón: Municipios: San Juan de los Cayos; Capadare, la Pastora; Estado Carabobo: Municipio JJ Mora y Estado Yaracuy: Municipios: Manuel Mongue y Bolívar.

Gráfico 2. Porcentaje de Seropositividad para los Virus de EEV y EEE en Bóvidos Procedentes de Municipios de Venezuela Mediante la Técnica de IHA.

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Conclusiones

1.-Considerar el uso y utilidad de bóvidos jóvenes lecheros como centinelas, para la detección precoz de anticuerpos contra las encefalitis equinas que circulan en el país, ya que nos permitiría inferir en forma oportuna un brote o epidemia de encefalitis equinas en cualquier región del país.

2.-El muestreo en équidos vacunados permite evidenciar en campo la eficacia y potencia de vacunas contra las encefalitis equinas así como el estatus inmunitario y protección de los équidos.

3.-La correlación de las coberturas de vacunación en équidos y el estatus inmunitario de bóvidos y équidos permiten conocer el riesgo de infección y enfermedad en las poblaciones susceptibles.

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Bibliografía:

• Acha P y Zyfres (2003). Encefalitis equina venezolana: In Zoonosis y enfermedades trasmisibles comunes al hombre. Tercera edición., Vol. 1, No. 3. Pp 94-98
• Calisher CH and Karatbasos N. (1988). Arbovirus serogroup definition and geographic distribution, 19-57. In T.P Monath (ed) The Arboviruses: epidemiology and ecology, Volum I CRC. Press, Inc. Boca Ratón. Florida.
• Clark DH. and Cassals J. 1958. Techniques for Hemagglutination and Hemagglutination-Inhibition With Arthropod-Borne Viruses. Am. J . Trop. Med. Hyg 7:561-573.
• De la Hoz F (2000). Encefalitis Equina Venezolana. MVZ-Cordova. 501 18-22.
• Dickerman R, Baker G, Ordonez J, Scherer W. (1973). Venezuelan Equine Encephalomyelitis Viremia and Antibody Responses of Pigs and Cattle. Am J Vet Res. ;34(3):357-61.
• Gallo M, Garfios B, Zarate M, Rosales C y Morilla A. (1979). Evaluación de la Respuesta Serológica de los Bovinos al Virus de la Encefalitis Equina Venezolana Infectados en Forma Natural y Experimental. Of. Panam. 86 (1). Pp 10-18.
• Garcia-Tamayo J. (1992). Efecto Teratogénico del Virus de la Encefalitis Equina Venezolana: Una Revisión del Problema. clín; 33(2):81-6.
• Kinney RM, Chang GJ, Tsuchiya KR, Sneider JM, Roehrig JT, Woodward TM, Trent DW. (1993). Attenuation of Venezuelan equine encephalitis virus strain TC- 83 is encoded by the 5′-noncoding region and the E2 envelope glycoprotein.J Virol.;67(3):1269-
• Morilla A, Bautista C, Zarate M, De la Torre M, Ortega C. (1999) Los bovinos Como Centinelas Para Detectar la Actividad del Virus de Encefalitis Equina Venezolana. In Encefalitis equinas por Arbovirus. Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias, SAGAR, México DF.. Pp 169-171.
• Medina G, Salas R, Siger J , Jaimes E, Morales G, y I Matheus. (2000) Virus de Encefalitis Equina Venezolana en el Municipio Catatumbo del Estado Zulia 1995-1996 I. Distribución y Comportamiento. Veterinaria Tropical 25(1): 41-61.
• Navarro JC, Medina G, Vasquez C, Coffey LL, Wang E, Suárez A, Biord H, Salas M, Weaver SC.(2005). Postepizootic Persistence of Venezuelan Equine Encephalitis Virus, Venezuela. Emerg Infect Dis. Dec;11(12):1907-15.

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Medina Gladys*, Tibisay Escobar**, Franco Bianchi**, Adriana Trujillo**, Virgilio
Hernández**, Irineo Matheus***

*Inv.;**M.V ***TAI

Av. Principal de las Delicias, Sanidad Animal, Laboratorio de Arbovirus-CENIAP/INIA,
Maracay, estado Aragua,
email: glmedina@inia.gob.ve; gladicitamedina1@hotmail.com