M.V. Medina Gladys, M.V.Trujillo, A; Pineda, E, Pico; C.; Barrios, Y.; Infante, Y.

La Encefalitis Equina del Este (EEE) es una enfermedad viral, zoonótica, perteneciente al género Alfavirus, familia Togaviridae. Los virus perteneciente a este género están asociados con enfermedades del sistema nervioso central de equinos y humanos y ambas especies son consideradas huéspedes terminales de la enfermedad (Brault y col., 1999; Weaver y col., 1999).

Según los criterios serológicos y moleculares, el Complejo viral de Encefalitis Equina del Este se divide en: variante Norteamericana (EEENA), cuyos huéspedes amplificadores se consideran las aves migratorias, locales y silvestres, estas variantes se distribuyen desde Canadá, pasando por las islas del Caribe y Panamá; mientras que para las variantes Suramericanas (EEESA), los huéspedes multiplicadores del virus se piensa que corresponden a mamiferos pequeños y roedores silvestres. Las variantes EEESA se distribuyen desde Panamá hasta Argentina (Casals, 1964; Calisher y col., 1980).

Las variantes EEENA se diferencian de las EEESA por su alta virulencia y patogenicidad en los humanos, de manera que la fatalidad en los casos humanos por EEENA oscila entre un 50% y 75% (Deresiewicz y col., 1997; Przelomiski y col., 1988). Esta diferencia puede ser atribuída tanto a los huéspedes amplificadores como a los vectores involucrados en los mecanismos de trasmisión (Powers y col, 2001).

En Venezuela, la ocurrencia de Encefalitis Equina del Este se presenta anualmente en diferentes regiones del país. No se conoce la proporción real de mortalidad en equinos, sin embargo la casuística sugiere que entre el 30% y 50% de los animales con sintomatología nerviosa muere por efecto del virus. Los brotes son esporádicos y limitados al número de hospederos susceptibles.

Los humanos aparentemente no son afectados por el virus de EEESA, pero se han detectado anticuerpos cuando los sueros de los mismos han sido evaluados serológicamente. Probablemente la enfermedad producida por el virus de EEESA que circula en Venezuela y países circunvecinos sea subclínica en humanos y se enmascare con cualquier otra patología de origen viral, por lo que debería hacerse un diagnóstico laboratorial diferencial en forma rutinaria.

En este estudio se describe la actividad de la onda viral de Encefalitis Equina del Este ocurrida en diferentes localidades del país durante los años 2009 y 2010 en Venezuela, y se dan recomendaciones para el control, profilaxis y vigilancia epidemiológica de esta patología.

Estudio de la actividad epizoótica

A mediados de Diciembre del 2009, se detectó enfermedad y mortalidad equina, acompañandose de sintomas nerviosos, en el Municipio Obispo del estado Barinas (al sur-oeste de Venezuela).

Durante la visita del personal del Instituto Nacional de Salud Animal Integral (INSAI), los propietarios reportaron enfermedad y muerte de los equinos con sintomatologia nerviosa, entre los cuales se mencionan: hiperexcitabilidad y/o depresión, caminar en círculos o tambaleante, parálisis progresiva y muerte.

Por ello, inicialmente, el personal del INSAI colectó 43 muestras séricas, distribuídos en: 21 sueros de equinos menores de 5 años, 10 sueros equinos con edades entre 6 años y 11 años de edad y 12 sueros equinos sin informacion de edad, correspondientes a cuatro fincas del municipio. Posteriormente durante el año 2010 se activó el Sistema de Vigilancia Epidemiológica por la mortandad equina y se inició el muestreo en los estados más afectados; colectándose en todo el país un total de 2.746 muestras séricas,distribuídos en 15 estados (Tabla 1).

Tabla 1. Distribución de muestras séricas por entidad federal y porcentajes de positivos a los virus de EEE por año

Las muestras fueron enviadas al Laboratorio de Arbovirus de Sanidad Animal-INIA, a fin de procesarlas por las técnicas de inhibición de la hemaglutinación (IHA) y 2-mercaptoetanol (2-ME) para la detección de anticuerpos y captura de IgM respectivamente; así como para aislamiento viral en cultivo de células VERO y ratones lactantes de muestras en fase aguda y cerebros de animales fallecidos. La identificación del agente causal se realizó por inmunofluorescencia indirecta (IFI) y la amplificación del genoma viral por PCR-RT utilizando cebadores genéricos para los alfavirus para posterior secuenciación.

Análisis y discusión de la actividad epizoótica de Encefalitis Equina del Este detectada en 2009-2010

El foco se inició durante las semanas 46 y 48 del año 2009 en las parroquias Obispos y La Luz del Municipio Obispos del estado Barinas, con una mortalidad menor al 10% y una letalidad del 100%. Los equinos más afectados fueron los más jóvenes (menores de dos años). Los animales fallecidos mostraron signos de afectación del sistema nervioso central y se reportó ausencia de vacunaciones contra los virus de encefalitis equina.

Durante la semana nueve (9) de febrero del 2010, se detectaron muertes equinas en la parroquia San Vicente, municipio Muñoz del estado Apure, activándose inmediatamente una alerta para la vigilancia epidemiológica de las encefalitis equinas. La onda o actividad epizoótica se distribuyó inicialmente en el noreste del estado Barinas, dirigiéndose posteriormente hacia el sur y afectando al estado Apure (Figura 1).

Figura 1. Dispersión de la actividad epizoótica del virus de EEE entre los estados Barinas y Apure, período 2009-2010 y la asociación entre las áreas de riesgo para las encefalitis equinas, según caracterización 2005.
Fuente del Mapa: INSAI. Boletín Epidemiológico. http://www.insai.gob.ve/insai/boletines

Posteriormente, se detectó actividad del virus en localidades de los estados Cojedes y Falcón. De acuerdo a los datos epidemiológicos suministrados, se presentaron un total de 53 animales fallecidos y 135 animales con síntomas compatibles a encefalitis equinas en diferentes localidades del territorio nacional (Figura 2).

Figura 2. Distribución de los equinos enfermos, fallecidos y aislamiento viral para EEE en Venezuela durante 2009-2010
Fuente: Laboratorio de Arbovirus de Sanidad Animal-INIA

La mayor parte de los animales muertos correspondían a animales jóvenes (menores de dos años), lo que podría sugerir la presencia de otro agente causal distinto a EEE, EEV que esté diezmando la población caballar en el país, dado que la presentación de enfermedad y muerte por alfavirus productores de encefalitis afecta a todos los grupos etarios susceptibles.

El análisis serológico para el virus de EEESA, utilizando la técnica de IHA, correspondiente al estado Barinas sugiere una seropositividad del 63% y para el estado Apure de 61%. En la Figura 3 se observa que el porcentaje de detección de anticuerpos contra el virus de Encefalitis Equina del Este fue mayor con respecto al virus de EEV en los dos estados, a pesar de la vacunación sistemática realizada contra el virus de EEV.

Figura 3. Porcentaje de seropositividad para los virus de encefalitis equinas en los estados Apure y Barinas 2009-2010

En el caso del estado Barinas (Figura 4), la evaluación serológica mediante la técnica de IHA y el levantamiento epidemiológico por parte del INSAI, permiten sugerir la afectación de cinco municipios por el virus de EEESA, con un porcentaje de seropositividad en los municipios Obispos (56%), Cruz Paredes (48%), Sosa (51%), Pedraza (68%) y Barinas (75%). Se detectó IgM en más del 17% de las muestras analizadas mediante la técnica de 2-ME. Por otra parte, se observó que el 65% de los sueros analizados mediante IHA alcanzaron títulos de ≥1:5.120.

Figura 4. Porcentajes de seropositividad para los virus de Encefalitis equinas, en Municipios del Estado Barinas

Estos resultados serológicos, aunado a la presencia de IgM, sintomatología nerviosa, la inexistencia de reporte de vacunaciones contra encefalitis equina y ausencia de enfermedad en los humanos sugerían la circulación activa del virus de EEESA.

En el estado Barinas ya para el año 2009 se apreciaba un incremento de la actividad al virus de EEESA con una seropositividad del 67,6% e incrementándose en el 2010 con un 70,5%. Lastimosamente, no se consideraron los elementos para la prevención y control del virus de EEESA, (colocación de vacunas para el control de los focos y disminución de los susceptibles) ocasionando durante el 2010 un gran deceso de equinos en esa región al igual que en los estados Apure, Cojedes y Falcón. Se piensa que la seropositividad detectada para el virus de EEV fue debido a efecto de vacunaciones previas y a efecto booster o potenciación de los niveles de anticuerpos por refuerzos vacunales.

El análisis de las muestras provenientes de otros estados se muestra en el cuadro 1. En el año 2009, los mayores porcentajes de seropositividad a Encefalitis Equina del Este se detectaron en Barinas (68%) y Cojedes (48%). Durante 2010 la mayor detección de seropositividad se presentó en los estados Barinas (71%), Cojedes (67) y Lara (32%). Es bueno mencionar que las muestras correspondientes a las entidades Dtto. Capital (59%) y Zulia (65%) proceden de haras e hipódromos donde los esquemas de vacunación son rigurosos, por lo tanto, los resultados arrojados de los análisis sugieren que la presencia de anticuerpos en estas muestras es por efecto de vacunaciones previas.

Se pudo aislar el virus de Encefalitis Equina del Este a partir de muestras procedentes del municipio San Juan Bautista del Pao, Estado Cojedes (3 aislados) y de la parroquia Tucacas, municipio Silva del estado Falcón (2 aislados). Los nuevos aislados virales se caracterizaron molecularmente utilizando cebadores genéricos para los alfavirus correspondiente a la región de las proteínas estructurales (Figura 5). Todas las muestras de cerebro fueron negativas al virus de la rabia.

Figura 5. Hallazgos de Laboratorio: A Efecto citopático en los cultivos celulares (VERO). B. Enfermedad y/o muerte en ratones lactantes inoculados. C. Inmunofluorescencia indirecta reacción positiva. D. PCR-RT positiva observándose la presencia de una banda cercana a 1800 nucleótidos.

Estos resultados permitieron inferir que se trataba de una actividad epizoótica del virus de Encefalitis Equina del Este. Es importante considerar que debido a la ausencia de muestras séricas y/u órganos de otras entidades federales no se observa un mayor numero de aislamientos. Tambien se debe tener en cuenta que muchas de las muestras enviadas de los estados Barinas y Apure correspondieron a animales aparentemente sanos para la realización de actividades de vigilancia epidemiológica de las encefalitis en esas entidades.

De alli la importancia, que al momento de enviar o remitir las muestras, las mismas deben estar acompañadas de una buena anamnesis, inicio de enfermedad, signos y síntomas, especies afectadas, tipo de vacuna, edad de los animales, número de animales afectados y/o fallecidos, de manera de orientar el diagnóstico y generar una respuesta veraz y oportuna para la toma de acciones y decisiones por parte de las autoridades nacionales competentes.

Agradecimiento

Este trabajo fue realizado gracias al financiamiento otorgado por el INIA para la prestación de servicios, así como también a Misión Ciencia Agenda Salud-Proyecto 2007001442.

Bibliografía

• Brault, A.; Powers, A.;Villareal, C.L.; Chavez, R.;Fraire, M.;Liera, L.F.; Kang, W.;Tesh, R.;Shope, R.; Weaver, S. (1999). Genetic and antigenic diversity among Eastern equine encephalitis viruses from north, central and South America. Am. J. Trop. Med. Hyg.579-586.
• Casals, J. (1964). Antigenic variants of eastern equine encephalitis virus. J. Exp. Med. 119: 547-565
• Calisher, C.H.;Shope, R.E.; Brandt, W.; Casals, J.;Karatbasos, N.; Murphy, F.A.;Tesh, R.B.;Wiebe, M.E. (1980).Proposed antigenic classification of registered arboviruses.Intervirology 14: 229-232.
• Deresiewicz, R.l.;Thaler, S.; Hsu, L. (1997). Clinical and neuroradiographic manifestation of eastern equine encephalitis. New England J. Medical. 336: 1867-1874
• Przelomiski, M.; O´Rourke, E.; Grady, G. (1988).Eastern equine encephalitis in Massachussets: A report of 16 cases, 1970-1984. Neurology. 38: 736-739
• Powers, A.; Brault, A.; Shirako, Y.; Strauss, E.; Kang, W.; Strauss, J.; Weaver, S. (2001).Evolutionary relationships and systematic of the alphaviruses. J.Virology.75:10118-10131
• Weaver, S.; Powers, A.; Brault, A.; Barret, A. (1999). Molecular epidemiological studies of veterinary arboviral encephalitides. The Veterinary Journal 157: 123-13
• Hill GE, Unnasch RS, Unnasch TR. (2010). Estimation of dispersal distances of Culexerraticus in a focus of eastern equine encephalitis virus in the southeastern United States. J.Med. Entomolog, Nov, 47 (6): 977-86.
• Zacks A and Paessler. (2011). Encephalitic alphaviruses. Vet Microbiol. Jan 27; 140 (3-4): 281-6.

M.V. Medina Gladys, M.V.Trujillo, A; Pineda, E, Pico; C.; Barrios, Y.; Infante, Y.
Edificio de Sanidad Animal-CENIAP/INIA. Laboratorio de Arbovirus. Maracay, estado Aragua, Venezuela.

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