Mayela L. Masab.1,2, Mayra Hidalgo2, Sara Papo2, Luís Pérez3, Hendrika Camargo1.

La rabia es una zoonosis mortal, causada por un virus neurotrópico (virus rábico) que afecta al sistema nervioso central, seguido de parálisis y muerte de las víctimas. El agente causal es el virus de la rabia, perteneciente al género Lyssavirus, y familia Rhabdoviridae. Se encuentra distribuido en todo el planeta y ataca a los mamíferos domésticos y salvajes, incluyendo al ser humano. En zonas urbanas, el reservorio principal es el perro, pero en nuestro país, como en otras naciones, además de esta especie, también se han identificado como reservorios gatos, bovinos y fauna silvestre (De Mattos y col., 2001).

La rabia continúa siendo un gravísimo problema tanto para la salud humana como la animal y su presencia enfatiza la utilidad de aplicar de manera estricta, los planes de vacunación anual contra la rabia para el ganado y las mascotas, además de la necesidad de controlar la población de vampiros, haciendo capturas periódicas a lo largo de todo el año y aumentándolas cuando se presentan los brotes (Hidalgo y cols., 2010).

Diversos países han logrado controlar el ciclo urbano de la rabia, pero el número de casos transmitidos por fauna silvestre ha aumentado, representando un riesgo potencial para la población animal y humana. El avance y progreso de las comunidades ha ocasionado la pérdida de nichos ecológicos donde habitan animales silvestres, los cuales migran hacia los centros poblados produciendo brotes de rabia y ocasionando graves problemas de salud pública (Patrick y cols., 2003).

Aunque el interés médico por el virus se centra en las infecciones del hombre, epidemiológicamente este es un callejón sin salida al ciclo infeccioso, ya que las personas contraen la rabia pero no transmiten normalmente la enfermedad. Es por ello, que surge la inquietud de estudiar las diversas especies animales que están involucradas en esta afección viral (Morin, 2005).

En vista que se disponía de un grupo de nueve (9) cepas de campo correspondientes a los años 2002 a 2006, resultó de especial interés conocer la patogenicidad de las cepas actuantes en los brotes durante ese periodo, definiendo la que puede resultar de mayor virulencia.

Evaluación de la Patogenicidad

Para la determinación de la patogenicidad, se utilizaron 675 ratones adultos y 1080 ratones lactantes albinos cepa NIH (Nacional Institute of Health, USA), así como nueve (9) cepas de virus rábico aisladas de diferentes especies y años en el territorio nacional (Cuadro 1), además de la cepa de referencia Challenge Virus Standard (CVS). Cuadro 1. Año, especie y entidad geográfica de las cepas estudiadas.

Tabla 1. Año, especie y entidad geográfica de las cepas estudiadas

Se prepararon diluciones quíntuples seriadas de las cepas virales por cada cepa en estudio y para ambas poblaciones de ratones. Se inocularon 0,03 ml intracraneal en cada ratón adulto, y 0,01 ml vía intracraneal a cada ratón lactante. Se observaron diariamente por 21 días, registrando cuatro aspectos de su condición: sano, incoordinado, postrado o muerto.

Se tomaron muestras de cerebro para confirmar la muerte por virus rábico, mediante la técnica de inmunofluorescencia directa (Meslin y cols., 1996).

Análisis estadístico. Se calculó el título infeccioso del antígeno viral de las diferentes cepas, en ambas edades de los ratones, por la ecuación de Reed y Muench (1938). Los resultados para los títulos antigénicos se analizaron utilizan do un modelo de Análisis de Varianza y para la comparación de pruebas de media se utilizó la Prueba de la Diferencia Honestamente Significativa de Tukey (Stockburger, 1998) con un coeficiente de variación (C.V) de 18%.

Hallazgos

Con respecto al análisis y la supervivencia de los ratones se utilizó un Modelo de Regresión Logística de Respuesta Multinominal no Ordenada (Ortega y Cayuela, 2002), que permite explicar el comportamiento de las frecuencias de las diferentes combinaciones del grado de patogenia presente en cada cepa.

Se calcularon todas las probabilidades que están presentes para cada caso, indicando que cambian con el tiempo y que las mismas difieren en cepas, dilución y edades de los ratones. Los análisis estadísticos se realizaron utilizando el software Minitab 14.0 para Windows y SAS 9.3 para Windows, de manera de evaluar el grado de patogenia que presenta cada cepa.

Los títulos obtenidos en ambas poblaciones de ratones (Cuadro 2), mostraron que para todas las cepas en general, el titulo viral en los lactantes es alto.

Tabla 2. Valores promedio del titulo viral para 9 cepas del virus rábico en dos poblaciones de ratones

Al comparar los dos grupos etarios, respecto a la edad y cepa estudiada; se encontró que las diferencias son altamente significativas (valor P=0,0001) (Cuadro 3) dado que en esta prueba de medias se evidencia que los lactantes presentaron títulos altos a mayores diluciones de virus, en comparación con los ratones adultos.

Figura 1. A: ratones con síntomas nerviosos. B: cerebro de ratón positivo a virus de la rabia por la técnica de inmunofluorescencia directa

Tabla 3. Análisis de varianza en el diseño factorial para los antígenos de virus rábicos, en ratones lactantes y adultos agrupados por cepa.

Con respecto a las cepas, se obtuvieron diferencias altamente significativas (P=0,0002), observándose que la virulencia difiere con cada cepa. El coeficiente de variación (C.V) fue 18%. Este valor es alto por el hecho que se está trabajando con animales vivos, los cuales no solo son diferentes por su carga genética sino también por ser grupos de edades diferentes, tal y como lo establecía el estudio.

Gráfico 1. Titulo viral vs cepas de campo en dos poblaciones de ratones

El comportamiento de la interacción edad con respecto a la cepa viral, se muestra en el gráfico 1, el cual resultó altamente significativo; allí se observó que la cepa del felino, aislada en el año 2004, no produjo una respuesta homogénea en las dos poblaciones estudiadas, mostrando poca variación en cuanto al título viral, en comparación con otras cepas, donde se evidenció la gran diferencia de virulencia para ambas edades de ratones (cepas de equino, canino y rumiantes).

Se compararon los títulos infecciosos y la supervivencia de las dos poblaciones de ratones, estudiándose cuatro condiciones (la probabilidad de que los ratones estén incoordinados, sanos, asintomáticos y sobrevivientes). Se evidenció que hasta el sexto día, de las nueve (9) cepas evaluadas, siete (7) presentaron, en la primera dilución y en ambas edades de animales, una probabilidad mayor de cursar con la fase prodrómica de la enfermedad. Solo la cepa de bovino, 2003 (Edo. Lara) y la felina, 2004 presentaron una menor probabilidad, es decir, el período de incubación fue mas prolongado.

Esto indica que la mayoría de estas cepas evaluadas presentaron fase prodrómica con igual duración en el tiempo, en ambas poblaciones de ratones.

A partir del día 10 al 15 en los ratones adultos, con una dilución de 10 ^–5 para la mayoría de las cepas, se presentó una mayor probabilidad de estar incoordinados, evidenciándose los diversos síntomas de la fase furiosa que presenta esta enfermedad, para las cepas de Equino del 2004 (Edo. Miranda); Bovino del 2002 (Edo. Zulia) y Bovino del 2002 (Edo. Aragua). Los animales inoculados con la cepa de equino, 2005 (Edo. Anzoátegui) mostraron estos síntomas bajo una dilución de 10 ^-4 .

Los signos clínicos de la enfermedad en los ratones lactantes se reflejó a partir del día siete (7) al 12, lo que demostró la poca resistencia que presenta esta población para neutralizar el virus de la rabia; la probabilidad de matar ratones fue uniforme en todas las cepas y en ambas edades, para una dilución de 10 ^–1 (Figura 1), siendo la cepa de bovino 2003 (Edo. Lara), la que obtuvo el mayor grado de infectividad; el día 13, ya que fue capaz de matar al 50% de los ratones infectados por el virus rabia.

En cuanto a los ratones que sobrevivieron a la virulencia antigénica, se obtuvo una probabilidad mayor en la cepa del felino del 2004 para ambas poblaciones de ratones, a una dilución de 10 ^-1  entre los días 19 al 21.

El título viral en ratones lactantes fue alto para todas las cepas en general, ya que a mayor dilución éste fue capaz de matar al 50% de los mismos, debido a que carecen de vaina de mielina y presentan un sistema inmunológico poco desarrollado.

La cepa de equino aislada en el estado Anzoátegui en el año 2005, fue más agresiva en los ratones lactantes que en los adultos, por lo anteriormente explicado. Se presentaron cepas con un comportamiento similar para ambas poblaciones de ratones, lo que significa que tuvieron la misma patogenicidad para lactantes y adultos, como es el caso de la cepa de bovino del 2002, procedente del estado Zulia y la cepa de ovino del 2002, procedente del estado Anzoátegui.

Sin embargo, se observó que la respuesta en ratones adultos no fue igual a la de ratones lactantes, pudiendo inferirse la existencia en campo de diferencias en la patogenicidad para animales jóvenes y adultos. Igualmente, de la evaluación de estas nueve cepas se puede desprender que la mayoría presentan fase prodrómica cuya duración en el tiempo es semejante, para ambas poblaciones de ratones.

También se demostró para algunas cepas, que a mayor dilución el virus es más patógeno, encontrándose que entre todas las cepas evaluadas la más patógena fue la del bovino del año 2003 procedente del estado Lara, Municipio Torres, Parroquia el Balance; debido a que presentó una capacidad de matar al 50% de los ratones infectados a una dilución mayor del virus y en un tiempo corto.

Se obtuvo un grado mayor de virulencia en la población de ratones lactantes, con un título de 104.52.DL50/0,02ml dosis de ratón intracerebral, a diferencia de los adultos, donde el mayor título obtenido fue de 10 ^3.35 DL50/0,03ml dosis de ratón intracerebral. Las cepas virales fueron más virulentas para la población de ratones lactantes. La cepa de Bovino 2002 procedente del estado Zulia, se comportó igual para ambas poblaciones de ratones.

Estos resultados permiten concluir que el grado de virulencia de las cepas puede variar entre especies animales y de una región a otra y la agresividad patógena de cada cepa depende igualmente de la cantidad de antígeno presente en el inóculo.

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Bibliografía

• Agresti, A. (2002) Categorical data análisis. 2ª Ediciòn. Wiley-Interscientle.New jersey. 710
• Hidalgo, M.; Papo, S. y González A. (2010). Análisis de la Rabia en Venezuela, período 2005-junio 2010. Revista Medicina Veterinaria Al Día, Vol. 1.
• De Mattos, C.A.; De Mattos, C.C.; Rupprecht, C. (2001). Rhabdoviruses. In: fields Virology. (Edited by Lippincott). Philadelphia: Fourth edition. Pàg. 1245-1277.
• Meslin F., Kaplan M., Koprowki H. (1996). Laboratory Techniques in Rabies. Fourth Edition. World Health Organization.
• Morín, B. (2005). Role of insectivorous bats in the transmission of Rabies in Chile. SciELO Chile, 31 (2): 1 – 11
• Stockburger D. (1998). Multivariate Statistic. Conceps, Models and Applications. Missouri State University Ed.
• Wayne, Daniel. (1999) Bioestadística, Base para el análisis de la Salud. 3º edición. 453 – 542.
• Zarate, T. (2003). Libro Virtual de la Rabia. Disponible en: http://www.visionveterinaria.com/rabia.doc. (consulta: Mayo 13 del 2006).

Mayela L. Masab.1,2, Mayra Hidalgo2, Sara Papo2, Luís Pérez3, Hendrika Camargo1.

1Universidad de Carabobo sede Aragua.
2Sanidad Animal, Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias (CENIAP)–Instituto Nacional de Investigaciones Agrícolas (INIA). Maracay.
3Universidad Central de Venezuela Facultad de Agronomía Maracay Estado Aragua, Venezuela.

madelomali03@yahoo.com

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