La Peste Porcina Clásica (PPC) o Cólera Porcino, es considerada una de las enfermedades que más perjudica la industria porcina mundial, convirtiéndose en la principal limitante de la productividad en países y granjas donde esta enfermedad se ha presentado, así como el mayor obstáculo de la comercialización nacional e internacional para las naciones donde existe.
La PPC es una enfermedad altamente contagiosa, que afecta a cerdos domésticos y silvestres. La gravedad de las consecuencias sanitarias, económicas y sociales, la colocan dentro de la lista de enfermedades de notificación obligatoria de la Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE) (OIE,2014).
La enfermedad, PPC, es causada por un virus ARN de 40 a 50 nm de diámetro, con envoltura lipídica, familia Flaviviridae, del género Pestivirus, estrechamente relacionado con los virus de la Diarrea Viral Bovina y de la Enfermedad de la Frontera. Solo existe un serotipo de virus de la PPC (VPPC) (Van Oirschot, 2000; Arias et al., 2004; SENASA, 2004; OIE 2014).
María A Trujillo U; José G Fernández F; Manuel J Méndez C. Instituto Nacional de Investigaciones Agrícolas. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias (INIA-CENIAP)
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Inmunidad y Diagnóstico de la PPC
La PPC constituye uno de los problemas de salud más importantes en las explotaciones porcinas en Venezuela por los daños que ocasiona, aumentando los costos de producción y teniendo un gran impacto económico en la comercialización de los animales y sus productos.
Existen varias cepas vacunales para controlar la PPC, sin embargo, la cepa China es la más usada por el alto grado de protección que confiere desde los cinco días de inoculada, siendo su mayor inconveniente no permitir diferenciar anticuerpos (Ac) vacunales de Ac por infección (Morilla, 1996; Mogollón y cols., 2002). La calidad de estos biológicos debe evaluarse mediante las pruebas de inocuidad y potencia en cerdos libres de anticuerpos maternales contra PPC.
Los anticuerpos maternos de cerdas vacunadas pueden suprimir la respuesta inmune protectora inducida por una vacunación en la progenie (Van Oirschot JT, 2000; Van Oirschot JT, 2003). Esta inmunidad pasiva se mantiene durante 5-8 semanas, inhibiendo la respuesta inmune humoral y celular inducida por la vacunación (Vandeputte et al, 2001; Suradhat et al, 2003). Los niveles de anticuerpos neutralizantes de origen materno (mayores a 1:64) causan disminución tanto de la respuesta humoral como celular, inducida por la vacuna de PPC.
Los anticuerpos maternos específicos contra el virus de la PPC se detectan por primera vez a las dos (2) horas después de iniciado el consumo de calostro, alcanzando un nivel máximo de cinco (5) a siete (7) horas después. Los anticuerpos neutralizantes en lechones lactantes son iguales o pueden ser superiores a los detectados en sus madres (Mogollón y Rincón, 2002).
La duración de la inmunidad materna en granjas vacunadas puede variar entre 6 y 9 semanas de edad dependiendo del protocolo de vacunación. El desafío de lechones vacunados contra PPC en presencia de altos niveles de anticuerpos maternos ha demostrado que estos animales desarrollan signos clínicos, viremia y el virus se ha podido aislar del suero y de los tejidos (Mogollón y Rincón, 2002).
Los anticuerpos contra el virus de la PPC pueden ser detectados por diferentes métodos, como seroneutralización (SN) y técnicas inmunoenzimáticas (ELISA) (Wensvoort et al., 1988; Rosell et al., 1994). Por otra parte, Jensen (1981) ha reportado que también se pueden encontrar anticuerpos en cerdos contra virus de la Diarrea Viral Bovina (DVB), dificultando el diagnóstico de la PPC; por esta razón se recomienda utilizar, preferentemente, aquellas pruebas que logran diferenciar los anticuerpos dirigidos contra el virus de la PPC de los anticuerpos contra virus DVB, como los anticuerpos monoclonales (Wensvoort et al., 1988).Actualmente, muchos países utilizan para sus programas de control y erradicación de la enfermedad las técnicas de SN y ELISA (Rosell et al., 1994). Las técnicas de ELISA permiten procesar un gran número de muestras, por lo que son de gran utilidad en áreas o países donde la PPC es esporádica o desea erradicarse (Rosell et al., 1994; Morilla, 1996).
PPC en Venezuela
Siendo una enfermedad endémica en Venezuela y de declaración obligatoria, es preciso vacunar todos los cerdos para disminuir la presentación de casos clínicos y por consiguiente la diseminación de la enfermedad. Actualmente, en nuestro país se utilizan vacunas contra PPC a base de virus vivo modificado cepa China, de origen en cultivo celular y cepa china lapinizada.
Cada lote de vacuna nacional o importada, es sometido a las pruebas de control de calidad por el Laboratorio de Control de Productos del INIA-CENIAP, como ente oficial encargado de este procedimiento. Entre las evaluaciones que se realizan, se encuentran las pruebas de potencia, la cual exige que todos los cerdos estén libres de anticuerpos maternales contra PPC, para lo cual se realiza un perfil serológico mediante la técnica de ELISA con la finalidad de la detección de anticuerpos frente al virus de PPC.
Objetivo
El presente trabajo tiene por objetivo determinar los niveles de Ac séricos contra PPC en cerdos para su uso en la prueba de control de calidad de las vacunas, condición exigida para poder evaluar los biológicos siguiendo los protocolos establecidos internacionalmente (CFR, 2002; OIE, 2014).
Materiales y Métodos
Población
En el laboratorio de Control de Productos del INIA-CENIAP se evaluaron un total de 90 cerdos mestizos a partir de las seis (6) semanas hasta las 13 semanas de edad, durante el año 2014 y 2015, proveniente de madres vacunadas contra PPC de diferentes granjas del país.
Obtención de las muestras serológicas
El muestreo se realizó a las 6, 8, 10, 12, y 13 semanas de edad a todos los animales. Se determinó el peso inicial promedio a las seis (6) semanas, que fue de nueve (9) kg.Se extrajeron cinco (5) mL de sangre a cada uno de los cerdos, mediante punción en la vena cava anterior en posición decúbito dorsal. Se recolectó en tubos al vacío, estériles y sin anticoagulante. Luego de la centrifugación, los sueros obtenidos se repartieron en alícuotas y congelaron a -20ºC hasta su análisis (Figura1) (Straw et al., 2000).
Detección de anticuerpos contra PPC
Se realizó mediante la técnica de ELISA de bloqueo (IDEXX CSFV Ab monoclonal) en el Laboratorio de Control de Productos del INIA-CENIAP.
El ensayo detecta en suero o plasma anticuerpos específicos frente al virus de la PPC. Los anticuerpos presentes en la muestra bloquean la unión del anticuerpo monoclonal comercial conjugado con peroxidasa anti-CSFV. Las placas de microtitulación se encuentran sensibilizadas con antígeno CSFV.
Para la interpretación de la prueba de ELISA se consideraron muestras negativas (sin anticuerpos) aquellas que resultaron con un porcentaje menor o igual al 30% de bloqueo, las muestras sospechosas las que expresaron entre 40 y 50% de bloqueo y las muestras positivas un porcentaje de bloqueo mayor o igual al 40% .
El porcentaje de bloqueo de la muestra se calcula a partir de la densidad óptica (OD 450) obtenida en la muestra y la densidad óptica (OD 450) del control negativo.
Resultados y Discusión
Mediante la técnica de ELISA se detectó, presencia de anticuerpos contra PPC en el 100 % (90/90) de los animales entre seis (6) y ocho (8) semanas de edad. A las 10 semanas de edad el 70% (63/90) de los cerdos aún estaban seropositivos (Cuadro 1), coincidiendo con Mogollón (2002), quien reporta que en lechones provenientes de granjas vacunadas la duración de la inmunidad materna puede variar entre seis (6) y nueve (9) semanas de edad, dependiendo del protocolo de vacunación.
Cuadro 1. Proporción de lechones seropositivos y seronegativos a Ac contra PPC por semana de edad provenientes de madres vacunadas
| Edad | SEROPOSITIVOS | SERONEGATIVOS | |
| (Semanas) | n % | n % | |
| 6 | 90/90 100 | 0/90 0 | |
| 8 | 90/90 100 | 0/90 0 | |
| 10 | 63/90 70 | 27/90 30 | |
| 12 | 09/90 10 | 81/90 90 | |
| 13 | 0/90 0 | 90/90 100 | |
Conclusiones
Este estudio permite inferir, que los anticuerpos maternos en cerdos provenientes de madres vacunadas confieren protección contra PPC hasta las 12 semanas de edad, con un peso promedio de 35-40Kg, por tanto, la utilización de cerdos de esta edad en pruebas de potencia de vacunas contra PPC, es tiempo ideal para garantizar la eficiencia de la técnica.
Igualmente es importante destacar que las evaluaciones de campo para determinar los niveles y persistencia de los anticuerpos pasivos contra el virus de PPC, permiten definir la edad adecuada de inicio de los programas de vacunación en lechones. Actualmente las vacunaciones se realizan a las ocho (8) semanas de vida, pudiendo entonces la persistencia de los Ac. Maternos estar interfiriendo en lograr una verdadera protección contra esta enfermedad por la persistencia de los Ac maternos y poder lograr el control y erradicación de PPC en Venezuela.
Referencias Bibliográficas
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