Karina Acosta
La salmonelosis es una enfermedad bacteriana causada por microorganismos negativos del género Salmonella, perteneciente a la familia Enterobacteriaceae. Existen cerca de 2.500 serotipos y cada uno se caracteriza por presentar antígenos específicos que pueden ser identificados mediante pruebas serológicas, siendo la más importante en el ratón la S. enterica subsp. enterica serovar Typhimurium, conocida como S. typhimurium y serovar Enteritidis, conocida como S. enteritidis. (Percy y col., 2007). La Salmonella también puede afectar al hombre, animales de laboratorio, aves y otros mamíferos.
Las Salmonellas son bacterias anaerobias facultativas, que crecen rápidamente en medios simples, entre sus características bioquímicas, importantes para su aislamiento, se encuentra que poseen un metabolismo oxidativo y fermentativo, producen ácido y a menudo gas durante la fermentación de la glucosa u otro hidrato de carbono, además casi nunca fermentan lactosa o sacarosa, reducen los nitratos a nitritos, utilizan citrato como única fuente de carbono, producen ácido sulfhídrico (H2S), son ureasa y fenilalanina desaminasa negativas. Las Salmonellas son resistentes a ciertas sustancias químicas (por ejemplo, verde brillante, tetrationato de sodio, desoxicolato sódico) que inhiben otras bacterias entéricas; por tanto, es útil incluir estos compuestos en los medios de cultivo para aislar Salmonella (Stellmacher, 1981; Broocks y col., 1999; Goyache, 2002, citado por Mamani 2010).
Dentro de una colonia de roedores, el mecanismo de transmisión más importante de la enfermedad es por vía oral. Las dietas y camas contaminadas pueden ser vías de infección, también las especies de animales latentemente infectados en los lugares de almacén, como roedores silvestres que invaden los depósitos de alimento. Los humanos, portadores «sanos», igualmente pueden introducir la infección a las colonias de roedores. La transmisión interespecies (hombre, ratón, rata, cucaracha, hormiga, tortuga, culebras, aves), es importante a ser tomada en cuenta. (Garmendia y col., 2000). El período de incubación de la salmonelosis en ratones comprende de tres (3) a seis (6) días.
Los hospedadores susceptibles son resistentes dependiendo de una serie de factores incluyendo la edad, (los recién nacidos se afectan más que los adultos), cepa, virulencia, ruta de inoculación, infecciones recurrentes, manipulación consecutiva de los animales que pueden perjudicar la respuesta inmune. Es importante tener en cuenta que la microflora normal crea una barrera natural en contra de la infección con Salmonella. (Percy y col., 2007).
Mamani (2010), reseña que el primer requisito para que se produzca la infección del hospedero es que la bacteria se encuentre en cantidades suficientes. Generalmente se requiere de una dosis infectiva mínima de 107 a 109 bacterias. Luego de la ingestión oral, la bacteria se enfrenta a severos cambios medio ambientales de pH ácido, aumento de temperatura, baja tensión de oxígeno y alta osmolaridad. La bacteria responde a estos cambios modulando la expresión de sus genes, para luego colonizar el intestino delgado, principalmente en íleon distal y ciego, específicamente en los enterocitos y células M, (células epiteliales especializadas que recubren los nódulos linfáticos de las placas de Peyer del íleon). Estas infecciones intestinales pueden evolucionar hacia infecciones extra intestinales, relacionado esto con la incapacidad de los macrófagos de destruir las bacterias ingeridas, la Salmonella se dispersa por el organismo, probablemente transportada por fagocitos, inicialmente vía linfática y después vía sanguínea, originando una bacteriemia que puede ser subclínica o sintomática, con riesgo elevado de evolucionar a septicemia, llegando a colonizar diversos órganos y provocando infecciones locales.
Los signos clínicos observados en roedores comprenden: diarrea, anorexia, pérdida de peso, conjuntivitis y mortalidad variable, (Percy y col., 2007). Un aspecto importante a destacar es el hecho que animales infectados se convierten en portadores sanos, siendo frecuente observar que animales adultos son portadores y los jóvenes suelen infectarse inmediatamente después del nacimiento. El estrés prolongado y otras enfermedades pueden precipitar un brote de salmonelosis en la colonia (Garmendia y col., 2000).
Las lesiones macroscópicas observadas por Nelson (1927); Ramírez, (1972); Ramírez (1976) citado por Manami (2010), refieren múltiples focos blanquecinos difusos en parénquima hepático, degeneración grasa, congestión, petequias y presencia de abscesos, esplenomegalia, en algunos casos pueden observarse puntos blancos de tamaño variable, hemorragias y congestión en parénquima pulmonar con focos neumónicos.
Si observamos la Figura 1 podemos evidenciar la presencia de estos focos blancuzcos en parénquima hepático y al establecer una comparación con un ratón sano como el de la Figura 4, observamos un parénquima hepático de aspecto normal con tonalidad vinotinto brillante.
Figura 1. Hepatomegalia con focos blanquecinos en superficie parietal
Entre las lesiones histopatológicas reportadas para esta enfermedad, se encuentran necrosis multifocales, con presencia de trombos venosos e infiltrado leucocitario en hígado, bazo, placas de Peyer y nódulos linfáticos mesentéricos (Percy y col., 2007). En ocasiones el tracto alimentario se encuentra normal, sin embargo, Trigo en el 2011), señala la existencia de una forma de enterocolitis aguda, con lesiones de enteritis catarral difusa, procesos hemorrágicos, hasta un proceso fibrinonecrótico grave en ciego y colon.
Garmendia y col. (2000), señalan que para erradicar la Salmonella se debe comenzar por la eliminación de las colonias afectadas y la desinfección de los equipos y cuartos contaminados, la esterilización o pasteurización de camas y alimentos; las cuales son técnicas efectivas para prevenir la recontaminación, implantación de programas de monitoreos microbiológicos en las colonias de animales; incluyendo al personal que trabaja con ellas y además realizar campañas de combate de roedores silvestres con rodenticidas ubicados en los alrededores de los bioterios y controlarlos diariamente.
Los antecedentes presentados permiten comprender la relevancia de un diagnóstico temprano de la salmonelosis en estas especies de roedores, las cuales son empleadas con frecuencia en la realización de distintos ensayos biológicos, como: Pruebas de farmacotoxicología de medicamentos, pruebas de toxicidad, pruebas de potencia y/o eficacia de biológicos, entre otros; pudiendo su existencia comprometer de manera negativa la calidad y/o confiablidad de los resultados que se obtienen en dichas pruebas. De allí el interés de este artículo en presentar brevemente el estudio de un caso clínico de salmonelosis en ratones albinos de uso en laboratorio.
Caso clínico
Se trabajó con 10 muestras de ratones albinos hembras de 17 semanas de edad con un peso aproximado de 22-24 gramos, con historia de término abrupto del periodo de lactancia, pérdida de peso, pelo erizado, sin signos de diarrea. Se procedió a realizar eutanasia por dislocación cervical como recomienda la American Veterinary Medical Association`s (AVMA) en el 2007. Se realizó inspección externa y se aplicó la técnica de necropsia, evidenciándose lo siguiente:
Lesiones anatomopatológicas
Presencia de hepatomegalia con focos blanquecinos difusos en ambas superficies (parietal y visceral), ocasionalmente se evidenciaron abscesos focales, presencia de esplenomegalia, aumento de tamaño de linfonódulos mesentéricos (Figura 1). El resto de los tejidos sin lesiones macroscópicas aparentes (Figura 2).
Figura 2. Hepatitis necrótica. Microscopio óptico 10x.
Una vez tomadas las muestras de cada órgano (sistema nervioso central, corazón, pulmón, hígado, bazo, estómago, intestinos delgado y grueso, riñones), se fijaron en formol neutro al 10% por 24 horas. Se continuó el procesamiento histológico realizándose deshidratación, aclaramiento e infiltración, que son los pasos secuenciales designados para remover toda el agua que se pueda extraer de los tejidos y reemplazarla con un medio que se solidifique, para así permitir el corte de estos tejidos. Posteriormente se realizó microtomía y coloración de rutina (Hematoxilina y Eosina) de las láminas histológicas.
Lesiones histopatológicas
En el hígado se observó hepatitis necrótica (necrosis coagulativas a licuefactivas multifocales de hepatocitos), (Figura 3), exudado inflamatorio leucocitario mixto difuso; congestión y degeneración vacuolar zonal, presencia de trombos en la pared de la vena centrolobulillar (Figura 4).
En el bazo, se encontraron focos necróticos licuefactivos en pulpa roja e hiperplasia de pulpa blanca. En pulmón se observó hiperplasia de folículos linfoides, con presencia de trombos en la pared de vasos sanguíneos. En riñones se observó trombos en vasos sanguíneos y congestión corticomedular. El resto de los órganos no presentaron lesiones microscópicas significativas.
Diagnóstico Bacteriológico
Figura 3. Hepatitis necrótica. Microscopio óptico 10x.
Figura 3. Hepatitis necrótica. Microscopio óptico 10x.
Figura 4. Trombo en vaso sanguíneo hepático. Microscopio óptico 10x.
Figura 4. Trombo en vaso sanguíneo hepático. Microscopio óptico 10x.Se tomaron biopsias hepáticas para cultivo bacteriológico y se sembraron en placas de agar sangre y agar Mc Conkey. Se incubaron a 37°C por 24-48 horas, empleándose un enriquecimiento selectivo (tetrationato, salmosist, selenito, Rappapert–Vassiliadis, entre otros) para inhibir el crecimiento de flora competitiva y aumentar su concentración. El resultado arrojó Salmonella grupo somático B que pueden ser la S. typhimurium y la S. bredeney.
Análisis Diagnóstico
El diagnóstico en estos ratones fue realizado asociando las manifestaciones clínicas, (término abrupto de la lactancia, muerte de madres lactantes) las lesiones anatomopatológicas claves encontradas durante la necropsia (múltiples focos blanquecinos hepáticos, esplenomegalia) realizando diagnósticos diferenciales con Corynebacteruim kutcheri, Hepatits Viral Murina, entre otros, pero el recurso que permitió confirmar un problema de salmonelosis en la colonia de animales evaluados, fue el aislamiento bacteriano con la respectiva caracterización bioquímica y serotipificación, que demostró la positividad para Salmonella grupo somático B.
Algunos serotipos de Salmonella se aíslan frecuentemente de roedores en cautividad y silvestres, con una morbilidad y mortalidad variable. Puede ocurrir infección asintomática de roedores con Salmonella, con excreción fecal intermitente por semanas o meses. La misma ha demostrado causar infección de compañeros de jaula, con mayor difusión de Salmonella a través de múltiples colonias de roedores (Swanson y col., 2007).
Interferencia de la salmonelosis en la investigación
La salud de un animal está siempre en riesgo de adquirir una variedad de infecciones, tales pueden ser inaparentes o no por lesiones macroscópicas u obvias. La clínica de una infección puede no ser observada hasta que el animal se enfrenta a situaciones de estrés, por ejemplo un procedimiento experimental. La mayoría de las infecciones en roedores son subclínicas y a menudo ocurren modificaciones en los resultados de una investigación debido a infecciones naturales en ausencia de infecciones clínicas. Por ello, la ausencia de manifestaciones clínicas de una infección tiene un limitado valor diagnóstico. De ahí que sea imprescindible la prevención de la infección y no solamente la prevención de enfermedades clínicas.
Por tal motivo, es de vital importancia que los médicos veterinarios encargados de los centros de producción de animales de laboratorios (Bioterios), establezcan como prioridad la implementación de controles microbiológicos de sus colonias, ya que esto permitirá la detección temprana de cualquier agente que pudiese estar interfiriendo con la salud de los animales destinados a ensayos de investigaciones, ensayos biológicos y tomar a tiempo las acciones correctivas pertinentes.
La salmonelosis se trata de un agente muy serio cuando se encuentra presente en una colonia de animales, no sólo porque causa alteraciones importantes, sino también porque puede ser transmitido a los cuidadores de animales y a los investigadores. Altera la actividad enzimático intestinal, el crecimiento tumoral, la respuesta inmune, la respuesta fisiológica y la susceptibilidad a otras infecciones (Garmendia y col., 2000).
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Bibliografía
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