Morales, J.R., C. Greko, Y B, Larsson

En los rumiantes está demostrado que las inmunoglobulinas no atraviesan la placenta, y por lo tanto el becerro nace sin o c on muy bajo nivel de inmunoglobulinas. Además el becerro tiene una gran concentración de cortisol plasmático (Osburn et al, 1974), que parece tener efectos inmunosupresivos (Revisado por Roth, 1985). En consecuencia la resistencia del becerro depende del suministro de calostro que es muy rico en inmunoglobulinas G1 (Ig. G1) y se debe garantizar la inmunidad del  recién nacido por una concentración óptima de inmunoglobulinas e ingestión a tiempo de calostro (Kruse, 1970 a y b).

El suministro de calostro puede estar afectado por diferentes causas, como la forma de la ubre, pezones gruesos, nacimientos débiles, madre convaleciente, partos distócicos, poca vigilancia de personal y condiciones predisponentes a edema de ubre (Broom, 1983; Hancock, 1983; Blood et al, 1986; Mora, 1988; Alkemade y Fiallos, 1989).

Los becerros con cantidades insuficientes de inmunoglobulinas, tendrán una alta incidencia de diarreas, neumonías y septicemia, con resultados negativos de alta morbilidad/mortalidad (Gay et al, 1965; Boyd et al, 1972; Thomas y Swann, 1973; Naylor et al, 1977; Tennant et al, 1979; Prior y Porter 1980; Davison, 1981; Blom, 1982; Corbeil et al, 1984).

Para determinar si el manejo del calostro es correcto en un rebaño, es necesario controlar el nivel de inmunoglobulinas en suero sanguíneo de becerro. Se conocen diferentes técnicas de laboratorio (electroforesis y pruebas inmunológicas) y de campo (refractómetro, glutaraldehído y turbidez del sulfato de zinc).

El objetivo de este artículo es la aplicación práctica (en campo) del refractómetro y la prueba de glutaraldehído, en el cual primero mide la concentración de proteína sérica total, que refleja aproximadamente el contenido de inmunoglobulinas en suero (Tennant et al, 1969, Mc Beath, 1971 y Boyd, 1972) y la glutaraldehído se basa en la formación coágulo insoluble de inmunoglobulina (Tennantet al, 1979).

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Metodología

Se seleccionaron 6 rebaños (A-F) mestizos Holstein, ubicados en el Distrito Silva del Estado Falcón. Para el muestreo realizado los días 15 y 16 de mayo de 1989, y se usaron todos los becerros con edades comprendidas en 3 y 21 días de nacidos. Según la información recopilada todos los nacimientos ocurren en el potrero. En las fincas A, B y F los becerros son separados de las vacas y criados artificialmente.

El resto de las fincas es el típico manejo rudimentario (Corrales colectivos, apoyo de la vaca antes del ordeño, amamantamiento después de ordenada y pastoreo). De acuerdo a la anamnesis registrada las fincas A, D y F se detecta alta morbilidad por diarrea y en la E y F alta mortalidad.

Las muestras fueron tomadas de la vena yugular en tubos de vidrio sin aditivos. Se dejaron coagular a temperatura ambiente, luego 1-2 días se centrifugaron, separando el suero para su análisis.

Prueba de Glutaraldehído

La aplicación de la técnica de glutaraldehído (Blom, 1982), es la mezcla de 0,5 ml de glutaraldehído 10% (diluido en solución salina fisiológica) con 0,5 ml de suero (tubo A). Con modificación de la técnica se hizo una dilución del suero de 1:2 en solución salina fisiológica y con esto se repite la prueba (tubo B). A los 15 minutos de preparadas las pruebas a temperatura ambiente (22–24 ºC) se procede a leer los tubos.

Se considera una muestra no coagulada en los tubos A y B como negativas (nivel insuficiente de inmunoglobulinas). Las muestras coaguladas A pero no en B son positivas (+) y los coágulos en ambos tubos se consideran fuertemente positivos (++).

Determinación de Proteínas Séricas Totales con Refractómetro

Se toma unas gotas del suero (2-3) y se coloca en la ventana del refractómetro (ATAGO MOD: SPR – T2 JAPÓN). Dicho aparato posee una escala que indica la concentración de proteínas séricas total.

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Resultados

Los resultados de la prueba de glutaraldehído y de proteína total del suero se comparan en el gráfico 1 y cuadro 1. Los resultados negativos (-) en glutaraldehído tiene un nivel de 44,1 g/l. Los valores correspondientes para sueros positivos (+) y fuertemente positivos (++) fue 56,2 g/l y 72, 1 g/l respectivamente.

Cuadro 1. Relación entre glutaraldehído y proteína sérica en 55 becerros

Gráfico 1. Distribución y relación de los resultados de la prueba de glutaraldheído y nivel de proteína total sérica de 55 becerros muestreados ubicados en las fincas A-F.

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Discusión

La aplicabilidad de la prueba de turbidez con sulfato de zinc para evaluar contenido de inmunoglobulinas en suero de becerro es bien conocida. Esta prueba del glutaraldehído requiere del reactivo en cantidades determinadas. Dicha sustancias se consiguen a un costo relativamente bajo. En el caso de la determinación de proteínas séricas totales con refractómetro, hay un costo inicial por el instrumento pero la aplicación de la prueba es rápida, sin necesidad de reactivos.

En los rebaños examinados se observa una gran variación del nivel de proteína sérica total (cuadro 2) indistintamente de la dad de los becerros (cuadro 3).

En Venezuela no se han determinado valores de referencia de proteína sérica total que indique hipo-inmunoglobulinemia. Larsson (1985) reporta que becerros con valores de proteínas menores de 55 g/l en suero y 60 g/l en plasma (Naylor et al., 1977) tienen alto riesgo de enfermarse. La diferencia entre estos dos valores corresponde aproximadamente al contenido de fibrinógeno en plasma. En el presente estudio se obtuvieron concentraciones inferiores a 55 g/l hasta en el 50% de los becerros en las diferentes fincas analizadas.

Se observó una correlación negativa (p< 0,01) entre edad y contenido de proteínas en suero (Gráfica 2). En un estudio de Suecia (Möllerberg et al., 1989) muestrearon becerros sanos con intervalos desde un (1) día hasta tres meses después del nacimiento. El nivel de proteínas séricas se mantuvo constante (≈ 60 g/l) entre los cuatro días y tres semanas de edad. La discrepancia entre estos resultados y los hallados en este estudio podría ser explicado por diferencias en los diseños de los trabajos. Los resultados aquí presentados incluyen valores de becerros sanos y con historia de diarrea. Es posible que una absorción intestinal disminuida y/o suministro insuficiente de nutrientes, haya contribuido a la caída de proteína detectada.

Gráfico 2 Relación de edad del becerro y el nivel de proteína sérica total.
Regresión Análisis de Varianza.
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(Se aprecia un trazado negativo al poerder 0,97.g/l (p 0,01) diariamente en 55 becerros tomados en seis fincas;Y= 70- 0,97X, ≤ X 21).

En el cuadro 2 se observa un rango muy amplio que fluctúa entre los valores de 41-85 g/l. Como se aprecia en el mismo cuadro, la finca A tiene el promedio inferior de proteína sérica total y el mayor número de muestras negativas a la prueba de glutaraldehído.

Cuadro 2. Comparación de resultados de prueba de glutaraldehído y proteína sérica total en diferentes fincas.

Las fincas analizadas (A-F), los becerros tienen valores menores de 55 g/l de proteína sérica total, en un porcentaje de la población que varía de un 17 hasta el 50% de las muestras. Los becerros entre 3 y 8 días de nacidos tenían el mayor promedio de proteína sérica total (66,2 g/l) en comparación con los becerros entre 9 y 14 días (60,2 g/l) y 15-21 días de edad con 54, 9 g/l (cuadro 3). Esta característica es observada entre los diferentes grupos etáreos de las mismas fincas muestreadas, con exclusión de la finca E y al aplicar un análisis de regresión para determinar la correlación entre la edad y el nivel de proteína sérica total, se halló una regresión diferente de cero (p<,01) y el nivel de proteína disminuyó en 0,97 g/l diariamente.

Cuadro 3. Relación entre edad de becerros y el nivel de proteína de suero y el resultado de prueba glutaraldehído

Las muestras que resultan negativas a la prueba de glutaraldehído son de animales mayores de ocho (8) días de nacidos. Eso concuerda con el catabolismo normal de inmunoglobulinas de origen materno, cuya vida promedio de Ig.G ha sido reportado aproximadamente de 17 días (Tizard, 1987). Se ha comprobado que becerros al consumir 2 lts. de calostro antes de las 6 horas de nacidos y un total correspondiente a 15% de su peso dentro de las primeras 24 horas alcanzaron un promedio de gammaglobulinas en suero de 15,6 g/l (Möllerberg et al, 1989). A los 20 días los niveles de gammaglobulinas se acercaron a 7,9 g/l, un valor donde la prueba de glutaraldehído tiene alta probabilidad de resultar positiva (Larsson, 1985).

En consecuencia, pruebas negativas de animales menores de 3 semanas de edad indican un suministro de calostro sub-óptimo.

La modificación presentada del método original para la prueba de glutaraldehído diluyendo el suero en solución salina fisiológica se hizo para obtener una mayor diferenciación. Un suero que coagula a esta dilución contiene relativamente más inmunoglobulinas. Es preferible que un alto porcentaje de los becerros en un rebaño alcance este nivel. En el rebaño A una sola prueba resultó fuertemente positiva y seis (6) negativas (Cuadro 2).

Este resultado indica fallas en el suministro de calostro, señalado también por el bajo promedio de proteína sérica total; lo que con toda probabilidad contribuye a la alta morbilidad por diarrea en neonatos de dicho rebaño.

Una alta morbilidad/mortalidad es una respuesta de condiciones ambientales, manejo y presencia de microorganismos con potencialidad patógena. La diferencia entre rebaños con o sin problemas en los neonatos muchas veces no se encuentran a nivel microbiológico, pero si en los factores mencionados. La transferencia adecuada de inmunoglobulinas maternas es un punto clave en la salud del becerro. Ambos métodos descritos tienen la finalidad de estimar el nivel de inmunoglobulinas en suero y pueden ser usados en campo para determinar si existe un manejo subóptimo de calostro, muestreando un grupo representativo de becerros.

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Morales, J.R. (1), C. Greko (2) Y B, Larsson (2)

1 Sociedad Venezolana de Buiatria Apdo. Postal 1134. Valencia 2001. Venezuela; 2 Universidad Central de Venezuela
Facultad de Ciencias Veterinarias Maracay Dirección Actual; Swedish University of Agricultural Sciencies, Faculty of
Vet. Med. Dept. Cattle and Sheep Diseases. Box 7019 S – 75007 Uppsala, Sweden.